制备色谱柱的维护方法

一、建议使用保护柱，避免颗粒进入色谱柱，引起堵塞；

二、建议选择合适pH范围的色谱柱，避免填料溶剂老化；

三、缓冲盐的正确使用：

缓冲盐通常使用不当会析出，堵塞筛板和填料，使填料板结，柱压升高，阻碍基质上键合相的碳链自由舒展，使色谱柱保留能力下降，柱效降低，缩短其使用寿命，缓冲盐析出后很难去除，因此正确的使用缓冲盐对延长色谱柱的使用寿命非常重要，具体方法如下：

“使用前过渡，使用后冲洗！”

1）等度条件：制备前后用过渡流动相冲洗柱体积不少于20-30个柱体积，或制备完成后用过渡流动相以1.0mL/min（根据柱规格调整）冲洗过夜；

2）梯度条件：制备前，用与初始流动相组成相同的流动相以工作流速冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积，制备后，用该过渡流动相冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积，且梯度尽量平缓，避免缓冲盐析出；

3）过渡流动相：有机相和水相的比例和分析流动相中两相比例一致，或者水相比例高于分析流动相，*不含缓冲盐；

四、避免强保留物质在色谱柱保留：

强保留物质在色谱柱中的累积是一个缓慢的过程，引起峰变宽和拖尾，使柱效下降，保留时间变化，柱压长高；对复杂样品很难判断其是否含有强保留物质，因此要预防这一切的方式，坚持每天分析完成后用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上。

清洗方法：

1）未使用缓冲盐，每天使用完成后用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上；

2）使用缓冲盐，用上述方法去除缓冲盐后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上；

3）补救方法：水→乙腈→异丙醇（或氯坊）→乙腈→水，每一步需要冲洗不少于30个柱体积。

注意：不要轻易打开柱头，因为柱头一旦打开，很难恢复到新柱的水平。